- Objetivo: Realizar cultivos y siembra de bacterias con diferentes métodos con los siguientes medios de cultivo: Maconkey y Estandar Metods de Agar. Para a posteriori realizar una observación al microscopio, previa preparación de muestras, de los resultados obtenidos.
- Material de laboratorio necesario para la práctica: Microscopio electrónico, placas de petry, portaobjetos, cubreobjetos, asa de siembra, mechero bunsen, pinza, agua destilada, medio de cultivo Maconkey, medio de cultivo Estandar Metods de Agar, placa calefactora, matraz Erlenmeyer, muestra de entero bacteria con E-coli, tubo con medio kliger, azul de metileno, tinción de Gram, tanita, lupa, asa de pica, tubo con medio kliger.
- Procedimiento: En primer lugar tenemos que preparar el medio de cultivo sobre el que después realizaremos las siembras:
- Para Estandar de Agar se sabe que para preparar 1000 ml de disolución se necesitan 23.5 gr del medio de cultivo Estándar de Agar, por lo que para preparar 400 ml se necesitan tomar 9.4 gr.
- Para Maconkey se sabe que para preparar 1000 ml de disolución se necesitan 50 gr del medio de cultivo Maconkey, por lo que para preparar 400 ml se necesitan tomar 20 gr.
Pesamos ambas cantidades (por individual, ya que realizareos dos medios de cultivo diferentes) en una tanita y los diluimos en 400 ml de agua destilada con ayuda de un imán para que la mezcla sea lo más homogénea posible. Posteriormente calentamos la muestra en una placa calefactora hasta el punto de ebullición (100ºC) y una vez alcance esa temperatura lamantenemos durante 4 minutos. A posteriori dejamos que se atempere a temperatura ambiente el medio de cultivo, cuando ya se ecnuetre en la temperatura exacta está listo para emplacar en las placas petry.
Una vez emplacado el medio de cultivo en las diferentes placas petry hay que esperar a que solidifiquen para que se puedan realizar las siembras con la muestra de enterobacteria E-coli.
Las siembras que realizamos son las siguientes:
- Siembra en Zig-Zag.
- Siembra en estría múltiple.
- Siembra de cuatro cuadrantes.
- Siembra según la técnica de los tres giros.
Realizamos también una siembra en un tubo con medio kliger con ayuda de un asa de pica; se realiza una picadura en el medio del medio del tubo, se saca y se realiza siembra en zigzag sobre el medio inclinado del tubo.
Realizadas las siembras las introducimos en la máquina de cultivo microbiológico y las dejamos a una temperatura adecuada de 24 a 48 horas.
A los dos días observamos las placas en las que ha habido crecimiento bacteriano para visualizarlo con mayor facilidad utilizamos una lupa de laboratorio, se observa que el crecimiento microbiano es mayor en el momento en que el asa tocó por primera vez el cultivo y a medida que avanzamos progresivamente el crecimiento microbiano y las colonias son menores. En las placas en las que si ha habido crecimiento microbiano tomamos una muestra con el asa de siembra de alguna de las colonias de la placa y las empleamos para hacer diferentes muestras sobre las que realizaremos diferentes métodos de tinción; tinción con azul de metileno y tinción de Gram.
- Observaciones: En el caso del tubo con medio Kliger, se puede ver que tras la siembra de microorganismos una vez ha crecido la bacteria sobre el medio, este ha cambiado de color rojo a amarillo en todo el tubo, por lo que sabemos que ha fermentado glucosa y lactosa. En la parte inferior del tubo hay aire por lo que ha habido una acumulación de gas, el PH que tiene es ácido.
- Fotografías tomadas en clase de diferentes partes del procedimiento:
- Muestra de enterobacteria E-coli de la que cogemos la muestra para realizar las siembras:
- Ejemplos de las siembras:
- Tinción de Gram:
- Observación del cambio de color del medio de cultivo Kliger:
- Observación al microscopio de le muestra de enterobacteria sembrada:
No hay comentarios:
Publicar un comentario